4%多聚甲醛固定细胞_室温_溶液_染色_防护眼镜
发布时间：2025-05-01 22:36来源：原创
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摘要：
多聚甲醛〔PFA〕固定是一种常用细胞固定方法，大量用途于免疫荧光、原位杂交实验中。它通过交联蛋白质、核酸，保持细胞结构完整性，和此同时减少细胞内酶活性对后续实验影响。
，于操作前需准备14%多聚甲醛溶液。通常状况下，使用4%浓度最为常见。将多聚甲醛粉末溶解于预热至60℃左右PBS缓冲液中，并连续搅拌直至完全溶解。为避免多聚甲醛聚合，可加入少量甲醇作为助溶剂。之后，将溶液过滤以去除也许存于不溶物，并调节pH值至7.4左右。
接下来是细胞固定具体步骤。对于贴壁细胞，先用PBS清洗两次，每次5分钟。然后向培养皿中加入适量4%多聚甲醛工作液，确保覆盖整个样品表面。室温下固定20分钟即可，若温度较低可适当延长固定时间。对于悬浮细胞，则要离心收集细胞并重悬于多聚甲醛中进行固定。
固定完成后，用PBS轻轻洗涤三次，每次5分钟，以去除残留固定剂。为了增强后续染色效果，有时还需进行透化处理。例如，用0.1%0.5% Triton X100于室温下透化510分钟。最后，按照实验需求进行封闭、染色操作。
4%多聚甲醛固定能够很好保存细胞形态、抗原性，是细胞学研究中很大技术。但要注意是，操作时应佩戴手套、防护眼镜，避免直接接触皮肤、眼睛。
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