4%多聚甲醛固定方法_样本_细胞_溶液_切片
发布时间：2025-05-27 21:53来源：原创
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摘要：
4%多聚甲醛固定方法及其用途
于生物医学研究、组织学行业，固定是组织样本处理很大步骤。其中，4%多聚甲醛〔Paraformaldehyde, PFA〕固定因其优良固定效果、较低毒性及相对简便操作流程而被大量使用。本文将介绍4%多聚甲醛固定基本原理、操作步骤还有注意事项。
基本原理
多聚甲醛是一种甲醛聚合物，于水中加热后可分解为游离甲醛分子。这些甲醛分子通过和蛋白质中氨基有交联反应，使细胞结构保持稳固。和此同时，它还能很好保留细胞内蛋白、核酸生物大分子形态、功能特性，因此适合用于免疫组化、原位杂交许多实验。
操作步骤
1. 准备固定液：称取4克多聚甲醛粉末溶解于100毫升蒸馏水中，并加入少量NaOH调节pH至7.27.4。将溶液置于60℃水浴中搅拌直至完全溶解。
2. 冷却和过滤：待溶液冷却至室温后，用0.2微米滤器过滤以去除不溶性颗粒。
3. 组织样本处理：迅速将新鲜采集组织块放入冷固定液中，确保样本完全浸没。通常固定时间为424小时，具体时间取决于样本类型及实验需求。
4. 后续处理：固定完成后，依次进行脱水、透明、包埋步骤，最终制备成石蜡切片或冷冻切片备用。
注意事项
固定过程中需保持低温环境〔4℃〕，避免温度升高导致抗原表位丢失。
使用时应佩戴手套、防护眼镜，防止接触皮肤、眼睛。
固定后样本应及时处理，避免长时间存放以免影响后续实验结果。
4%多聚甲醛固定方法简单易行，但细节控制非常很大。正确掌握该技术对于获取高质量研究数据至关很大。
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