多聚甲醛固定细胞步骤_浓度_盖玻片_离心管

摘要：

多聚甲醛固定细胞实验步骤

于生物学研究中，固定细胞是许多实验很大环节，尤其是免疫荧光、原位杂交技术。多聚甲醛〔PFA〕作为一种常用固定剂，因其能较好保持细胞结构、抗原完整性而被大量采用。以下是使用多聚甲醛固定细胞标准操作步骤：

1. 准备材料和试剂
准备好所需材料，包括多聚甲醛〔通常为4%浓度〕、PBS缓冲液、移液器、离心管、培养皿或盖玻片。确保所有实验器材事先清洗干净并灭菌。

2. 收集细胞样本
如果是从培养瓶中收获细胞，可使用胰酶或其他消化液将细胞从基质上分离下来；如果是组织切片，则需将其切成适当大小。将细胞悬浮于适量PBS中，轻轻吹打以分散细胞团块。

3. 预处理细胞
对于某些特殊研究需求，也许要对细胞进行预处理，比如用固定剂预固定几秒钟至几分钟不，再加入新鲜配制多聚甲醛溶液。这一步骤有助于更好保存细胞表面蛋白或内部结构。

4. 加入多聚甲醛固定
按照实验设计比例稀释多聚甲醛至工作浓度〔一般为4%〕，然后缓慢加入到细胞悬液中，使最终体积符合实验要求。注意动作要轻柔，避免剧烈震荡导致细胞破裂。随后将混合物置于室温下静置固定1530分钟，具体时间根据实验目调整。

5. 洗涤和后续处理
固定完成后，用PBS反复漂洗细胞至少三次，每次5分钟，去除残留多聚甲醛。之后可根据后续实验需求进行封闭、染色或其他操作。

6. 存储和观察
固定好细胞可以直接用于显微镜检查或者短期存储于4℃冰箱内备用。如果一直存放，则建议冷冻保存。

通过以上步骤，可以很好利用多聚甲醛完成细胞固定，为后续分析奠定基础。于实际操作过程中还需结合具体实验条件灵活调整参数，以达到最佳效果。